酚 氯仿提取dna
酚氯仿法是一种传统的DNA提取方法，通过酚和氯仿两相系统将DNA从细胞中萃取出来。以下是酚氯仿法提取DNA的步骤：
1. 细胞破碎：首先将含有目标细胞的培养物固定在离心管中，然后使用生理盐水或缓冲溶液洗涤细胞悬浮液。加入细胞破碎缓冲液（如TE缓冲液），用研钵或超声波处理将细胞破碎，释放DNA。
2. 酚-氯仿提取：加入等体积的酚-氯仿混合液（具有pH 8.0-8.3）到破碎细胞悬液中，并充分混合。离心在高速下（约12000×g）约15分钟，产生两个相分离：上层为水相（含有DNA），下层为有机相（含有蛋白质和碎屑）。
3. 收集DNA层：使用橡胶手套将上层水相转移至新的离心管中，避免带入有机相。注意不要吸取界面区域。
4. 酚萃取：将DNA溶液加入相同体积的酚和氯仿的混合液中，并充分混合，离心约5分钟。上层为DNA溶液，下层为残留的有机相。
5. 收集DNA：将上层DNA溶液转移到新的离心管中。
6. 醇沉淀：加入两倍体积的冷乙醇（绝对乙醇或70%乙醇）到DNA溶液中，并轻轻颠倒混合。放置15-30分钟以沉淀DNA。
7. 洗涤和干燥：使用70%乙醇洗涤沉淀的DNA，去除盐和杂质。使用干燥试剂将DNA干燥，如无水乙醇或氮气吹干。
8. 重溶：使用缓冲液（如TE缓冲液）将DNA重溶。
需要注意的是，酚氯仿法虽然简单易行，但有机相的使用和处理过程中存在一定的毒性和危险性，需要注意个人安全和实验室安全。此外，由于该方法对DNA质量易受各种污染的影响，提取的DNA需要经过进一步纯化和测定质量，以确保可靠的结果。
