dna用ctab提取的原理
CTAB(正十四烷基三甲基溴化铵)提取法是一种常用的DNA提取方法,特别适用于植物组织等含有丰富多酚类化合物和多酚氧化酶的样品。下面是CTAB提取法的原理:
1. 组织破碎和裂解:样品通常是通过机械方法(如研钵研磨)或液氮冷冻研磨来破碎和裂解。接着,使用CTAB缓冲液来进行细胞膜和核膜的裂解,使DNA被释放到溶液中。
2. 蛋白质的去除:CTAB能够与细胞内的蛋白质结合形成复合物,这些复合物可以被盐(如NaCl)沉淀下来。通过加入盐溶液,蛋白质会沉淀于上清液中,而DNA会保留在上清液中。
3. RNA的去除:RNase A(核酸酶A)是一种能够降解RNA的酶。在CTAB提取过程中,会加入RNase A来降解样品中的RNA。RNase A可以专一性地降解RNA,而对DNA没有影响。
4. DNA的沉淀:通过加入等体积的氯仿和异戊醇混合液,可以将DNA从上清液中提取出来。氯仿和异戊醇能够与水和CTAB形成两个不相溶的液相,通过离心将两个相分离,DNA会沉淀在底部有机相中。
5. DNA的洗涤:通过洗涤剂和乙醇的沉淀,去除沉淀中的盐和其他残留物质。洗涤剂通常是乙醇溶液或异丙醇,可以用于去除盐离子和其他杂质。然后通过离心将洗涤液去除。
6. 重溶:最后一步是将DNA重溶在适当的缓冲液中。这个缓冲液可以用于DNA的贮存或后续实验。
CTAB提取法主要是通过CTAB缓冲液和沉淀步骤来分离DNA。CTAB与蛋白质、RNA等有不同的亲和性,从而实现对DNA的提取和纯化。