ht29细胞dna提取方法
HT-29细胞是一种来源于人类结肠腺癌的细胞系,常用于癌症研究。以下是一种常见的HT-29细胞DNA提取方法:
1. 培养HT-29细胞:在含有适宜培养基(如DMEM/F12)和10% 胎牛血清的细胞培养皿中培养HT-29细胞,使其达到对数生长期。
2. 收集细胞:用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤细胞两次,以去除培养基和血清。
3. 细胞裂解:使用细胞裂解缓冲液(例如含有10 mM Tris-HCl pH 8.0,0.1 M EDTA,0.2% Triton X-100的缓冲液)裂解细胞。将裂解缓冲液加到培养皿中,轻轻摇动培养皿以完全裂解细胞。
4. 白细胞溶解:使用白细胞溶解缓冲液(例如含有10 mM Tris-HCl pH 8.0,0.2 M NaCl,5 mM EDTA,0.5% SDS的缓冲液)裂解白细胞,以释放DNA。
5. 蛋白质沉淀:加入等体积或稍多于细胞裂解液的氨基硫酸钠混悬液并充分混合。静置片刻,使蛋白质沉淀到离心管底部。
6. DNA沉淀和洗涤:倾倒上清液,加入等体积的异丙醇混悬液,缓慢摇晃离心管以促使DNA沉淀。将DNA沉淀用70%乙醇洗涤一次或多次,以去除杂质。
7. 溶解:将洗涤后的DNA沉淀用适量的缓冲液(如纯化水或TE缓冲液)溶解,使其浓度适用于后续实验。
在进行HT-29细胞DNA提取之前,确保遵循无菌操作规程,以避免污染。同时,注意使用合适的试剂和缓冲液,根据所要求的实验目的进行适当的调整。