提取dna的方法及步骤
有多种方法和步骤可用于植物 DNA 的提取,下面列出一种常见的 CTAB 方法:
步骤 1: 样品准备
1.1 选择要提取 DNA 的植物材料,可以是叶片、茎、根等。将样品冷冻保存或者新鲜使用。
1.2 若是新鲜样品,可将样品细碎、磨碎或切成小片状。
步骤 2: 组织破碎和细胞壁溶解
2.1 将细碎的样品转移到一个离心管中。
2.2 加入细胞溶解剂(常见的 CTAB 缓冲液),混匀。
2.3 在 60°C 水浴中孵育 30 分钟至 1 小时,破坏细胞壁和细胞膜,释放 DNA。
步骤 3: 蛋白质消化
3.1 加入适量的蛋白酶 K 溶液,混匀。
3.2 在 37°C 水浴中孵育 1 小时至数小时,降解蛋白质。
步骤 4: DNA 沉淀
4.1 加入等体积的酚-氯仿或酚-氯仿-异戊醇除蛋白液。
4.2摇晃混匀,离心分离上清液和有机相。
4.3 将上清液转移至新的离心管中。
4.4 加入等体积的冷结晶盐(如氯化钠),混匀,使 DNA 沉淀。
4.5 在室温下离心 10-15 分钟,以最大速度沉淀 DNA。
4.6 倒掉上清液,沉淀过程中尽量避免碰触 DNA 沉淀。
步骤 5: 洗涤和纯化
5.1 加入 70% 的乙醇,轻轻洗涤 DNA 沉淀。
5.2 离心数分钟后,倒掉乙醇。
5.3 重复洗涤一次,去除残留的盐离子和有机溶剂。
5.4 最后,将离心管倒置,用纸巾或吸管轻轻吸干余留的乙醇。
5.5 空置一段时间,待 DNA 干燥。
步骤 6: 重悬 DNA
6.1 加入适量的 TE 缓冲液(含 Tris-HCl 和 EDTA)或水溶解 DNA。
6.2 轻轻摇晃离心管,使 DNA 完全溶解。
完成后,提取到的 DNA 可用于进一步的分子生物学实验,如 PCR、限制性内切酶消化、测序等。
需要注意的是,不同植物物种和样品的 DNA 提取方法可能会有所不同,需要根据具体情况选择适当的方法和试剂盒,并参考相关的文献和专业技术手册操作。