ctab提取dna原理步骤

CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)提取DNA是一种常用的基因组DNA提取方法。以下是CTAB提取DNA的原理步骤:

 

1. 细胞破裂:将待提取的样本经过初步破碎处理,常见的方法包括机械破碎、离心破碎或冷冻研磨等,以破坏细胞壁和细胞膜。

 

2. 细胞溶解:将破碎后的样本加入含有CTAB缓冲液的试管中,并将其加热至65-68℃。CTAB会与细胞壁中的聚糖结合,破坏细胞壁,帮助细胞溶解。

 

3. 蛋白质沉淀:加入蛋白酶K和NaCl,使蛋白质完全沉淀。CTAB与蛋白质结合形成络合物,在高盐浓度下沉淀。

 

4. DNA沉淀:加入等体积的氯仿/异戊醇混合溶液,在离心过程中将DNA分离到上层水相中。异戊醇可以溶解脂质,而氯仿则将异戊醇和水相分离。

 

5. DNA沉淀洗涤:使用70%乙醇或以特定的乙醇浓度沉淀洗涤DNA,以去除残留的油脂和杂质。

 

6. DNA溶解:使用TE缓冲液(含有Tris-HCl和EDTA)溶解沉淀下的DNA,以得到高纯度的DNA溶液。

 

在CTAB提取DNA的过程中,CTAB对细胞壁具有裂解作用,蛋白质沉淀能够去除细胞内的蛋白质,而氯仿/异戊醇混合溶液可以将DNA与其他溶液分离。该方法适用于提取植物、真菌和一些动物组织的高质量DNA,供后续的分子生物学研究使用。

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