dna提取的酚抽提法

DNA提取的酚抽提法是一种常用的提取DNA的方法。以下是该方法的步骤:

 

实验材料和试剂:

1. 待提取DNA的细胞样品或组织样品

2. 细胞裂解缓冲液(含有盐和洗涤剂)

3. 蛋白酶K或其他蛋白酶

4. 酚酞酸溶液(pH 8.0)

5. 氯仿-异戊醇混合液

6. 异丙醇

7. 70% 乙醇

8. TE缓冲液(pH 8.0)

 

实验步骤:

 

1. 准备样品:将待提取DNA的细胞样品或组织样品收集到1.5 mL离心管中。如果样品是组织样品,需要使用组织细胞裂解缓冲液将其均匀裂解。

 

2. 细胞裂解:向样品中加入适量的细胞裂解缓冲液,混匀。细胞裂解缓冲液中的盐和洗涤剂能够破坏细胞膜和核膜,释放DNA。

 

3. 蛋白质去除:加入适量的蛋白酶K或其他蛋白酶,对样品中的蛋白质进行消化。可以通过轻轻颠倒管子或低速离心来帮助蛋白质消化。

 

4. 抽提DNA:向样品中加入等体积的酚酞酸溶液。轻轻颠倒管子,使溶液充分混合。然后加入等体积的氯仿-异戊醇混合液,再次轻轻颠倒混合。

 

5. 离心分离:在低速离心下,沉淀会分为两层,上层为水相(含有DNA)和蛋白质,下层为有机相。DNA主要存在于水相中。

 

6. 收集DNA:使用微量移液器或吸管,将上层的水相转移至另一个离心管中,避免吸取沉淀层和下层的有机相。

 

7. 沉淀DNA:向收集的水相中加入相同体积的异丙醇,并轻轻颠倒管子使DNA沉淀。如果DNA不易沉淀,可通过用冷冻(-20°C)或旋转浓缩(将DNA溶液置于浓缩器中)来增加沉淀效果。

 

8. 洗涤和干燥:用70% 乙醇洗涤DNA沉淀,以去除盐和其他污染物。然后将管子倾斜放置,让乙醇自然蒸发或使用微量移液器吸去乙醇。

 

9. DNA溶解:将沉淀的DNA溶解在适量的TE缓冲液中。

 

这是酚抽提法的基本步骤,具体操作可能因实验要求和样品特点而有所不同。因此,在进行实验时,最好参考相关文献或试剂盒说明书,并根据实验要求进行调整。

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