怎么提取dna

DNA提取是一种常见的实验技术,以下是一种常用的DNA提取方法:

 

材料和试剂:

- 细胞或组织样本

- 细胞裂解缓冲液(比如含有盐和洗涤剂的缓冲液)

- 蛋白酶K

- 碱性蛋白酶/蛋白酶(Proteinase K)

- 乙醇

- 双氯苯酚溶液(溶于异丙酚或三氯化锠)

- TE缓冲液(含有Tris和EDTA)

 

步骤:

1. 如果是细胞样本,首先将细胞洗涤一次,去除细胞培养液或培养基。如果是组织样本,可直接进行下一步。

2. 将细胞或组织样本加入细胞裂解缓冲液中,用pipette轻轻悬浮样本,完全裂解细胞或溶解组织。

3. 加入碱性蛋白酶/蛋白酶和蛋白酶K,然后在恒温摇床上轻轻摇动或在恒温水浴中孵育,使酶能够降解细胞或组织中的蛋白质。

4. 加入等体积的双氯苯酚溶液,混合均匀。双氯苯酚会与蛋白质结合形成沉淀,可以用离心进行沉淀分离。

5. 将上清转移到新的离心管中,加入等体积的冰冷乙醇,混合均匀。乙醇会使DNA沉淀。

6. 使用离心机在低温下离心样本,以最大速度离心5-10分钟。离心后,会看到一个白色的DNA沉淀在离心管底部。

7. 将上清小心地倒掉,避免让DNA沉淀破坏。

8. 加入70%乙醇洗涤DNA沉淀,然后使用离心机以相同速度离心1-2分钟。倒掉上清。

9. 重复洗涤一次,然后去除残留的乙醇,并在室温下静置片刻使DNA干燥。

10. 加入适量的TE缓冲液重新溶解DNA。

 

注意事项:

- 在进行DNA提取过程中,需要保持样本的纯度和避免外源性DNA的污染。

- 所使用的试剂需保证无RNase和DNase的污染。

- 操作过程要严格遵守无菌和操作规程,以防止DNA的降解和样品的污染。

- 提取得到的DNA可以用于后续的PCR、测序、酶切等实验。

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