游离循环dna提取

游离循环DNA(circulating cell-free DNA,ccfDNA)提取是一种从体液中提取DNA的方法,其步骤如下:

 

1. 样本收集:收集待提取DNA的体液样本,常见的有血浆、血清、尿液等。

 

2. 样本预处理:离心样本,去除细胞碎片和颗粒物,得到清晰的上清液。

 

3. DNA裂解:将上清液转移到新的离心管中,加入裂解缓冲液,如胰蛋白酶K,蛋白酶等。温育反应混匀,使细胞膜破裂,释放DNA。

 

4. DNA沉淀:加入等体积的酚/氯仿混合液,缓慢混匀。然后离心,使上清液与酚相分离,DNA在底部的有机相中沉淀。

 

5. DNA洗涤:将有机相转移至新的离心管中,加入异丙醇,缓慢混匀,沉淀DNA。离心,去除上清液。重复洗涤2-3次,以去除携带的杂质。

 

6. DNA溶解:去除残余的异丙醇,将DNA沉淀干燥至无异丙醇。然后加入适量的溶解缓冲液,如Tris-HCl缓冲液或水,使DNA溶解。

 

7. DNA质量检测:使用紫外吸收分光光度计检测DNA的浓度和纯度。此外,也可以进行凝胶电泳检测以确定DNA的分子大小和完整性。

 

需要注意的是,游离循环DNA提取的步骤可能会根据不同的DNA提取试剂盒和实验室的要求而有所不同。为了确保准确和可靠的提取结果,建议参考相关的文献或使用专门的DNA提取试剂盒进行操作。

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