ffpe dna提取
FFPE DNA(Formalin-Fixed Paraffin-Embedded DNA)提取是从经福尔马林固定和石蜡包埋的组织样本中提取DNA的过程。以下是一般的FFPE DNA提取步骤:
1. 切片:从石蜡块中切割4-10微米厚的组织切片。
2. 去除石蜡:将切片放入含有去蜡剂(如xylene或n-heptane)的容器中,将石蜡溶解并去除。
3. 洗涤:使用酒精序列(如100%乙醇,95%乙醇和70%乙醇)洗涤切片,去除残余的蜡和其他污染物。
4. 脱水:将切片在思佳波解液(如xylene)中再次脱水,使其干燥。
5. 脱核蛋白:加入蛋白酶K(Proteinase K)消化液,使组织中的核蛋白断裂,释放DNA。
6. DNA修复:添加DNA修复试剂,修复DNA上的截断和损伤。
7. DNA提取:加入提取缓冲液,使用离心等方法将DNA从溶液中沉淀下来。
8. DNA洗涤:使用乙醇洗涤缓冲液洗涤DNA,以去除盐和其他污染物。
9. 干燥:将DNA空置一段时间以干燥。
10. 溶解DNA:加入适量的溶解缓冲液,溶解DNA。
11. DNA质量和浓度检测:使用分光光度计或其他方法测量DNA的浓度和纯度。
请注意,以上步骤仅作为一般参考,具体的FFPE DNA提取步骤应根据所使用的提取试剂盒的说明书进行操作。