ctab法提取dna详细步骤
CTAB法(Cetyltrimethylammonium bromide法)是一种常用的DNA提取方法,以下是详细的步骤:
1. 组织样本制备:将要提取DNA的组织样本(如植物叶片、动物组织等)切碎,放入离心管中。
2. 组织细胞破碎:加入适量的细胞破碎缓冲液(如PBS缓冲液),再加入细胞壁降解酶(如蛋白酶K)和脱氧核糖核酸酶(如RNase A),温育30分钟至1小时。
3. 组织细胞裂解:加入相同体积的CTAB裂解缓冲液,充分混匀,温育65℃下1小时。
4. 蛋白质沉淀:加入等体积的氯仿/异戊醇混合液,充分混匀,离心沉淀10分钟。
5. DNA沉淀:将上清液转移至新的离心管中,加入相同体积的异丙醇,缓慢旋转离心1小时,离心速度为12000g。
6. 洗涤:将上清液倒掉,加入70%的乙醇洗涤。重复2次。
7. 干燥:在室温下待乙醇完全挥发后,通常可将DNA溶于TE缓冲液或水中。
8. 质量检验:使用紫外吸收分光光度计检测DNA的纯度和浓度。
需要注意的是,CTAB法提取DNA的步骤可能会因实验室和样本类型的不同而有所微调。建议在进行实验前先参考相关的文献或专业实验室的建议。较复杂的样本或需要较高纯度的DNA提取,可能需要在CTAB法中进行额外的步骤或使用其他的DNA提取方法。