ctab法提取植物总dna

CTAB法是一种常用的提取植物总DNA的方法,CTAB是指十六烷基三甲基溴化铵(Cetyltrimethylammonium bromide)。以下是使用CTAB法提取植物总DNA的步骤:

 

1. 样品处理:将植物组织样品切碎至粉末状,并将其加入含有CTAB缓冲液的离心管中。CTAB缓冲液可以包含CTAB、EDTA(乙二胺四乙酸)和Tris-HCl(三氯化铊)。根据实际需要,可以加入适量的β-巯基乙醇或DTT(二硫代巯基磺酸)等还原剂,以帮助破坏细胞壁和蛋白质。

 

2. 细胞破碎:在加入缓冲液后,样品需要通过机械方法(如搅拌器或超声波)或化学方法(如液氮冷冻-回溶)来破碎细胞,并使DNA释放到缓冲液中。

 

3. 蛋白质溶解:加入一定量的蛋白酶K和SDS(十二烷基硫酸钠),并温育样品,将蛋白质溶解。

 

4. DNA沉淀:加入等体积的氯仿/异戊醇混合溶液,混合均匀。这会使DNA溶于水相,而蛋白质会溶于有机相。离心后,DNA会被沉淀到上清中。

 

5. DNA纯化:将DNA沉淀于75%的乙醇中,用1×TE缓冲液洗涤沉淀,除去残留的盐和其他杂质。

 

6. 最后的DNA溶解:用适量的TE缓冲溶解DNA,并进行质量和浓度的测定。

 

使用CTAB法提取植物总DNA时,需要注意的是,样品的处理需要在低温下进行,以保护DNA的完整性,而且在提取过程中需要避免污染,比如穿戴手套、更换物品表面的膜等。此外,根据样品的鲜重和种类的不同,还需要调整提取试剂的比例和使用量。最后,提取得到的DNA可以用于各种遗传分析,如PCR扩增、测序等。

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