chelex-100提取dna
Chelex-100是一种常用于DNA提取的树脂材料,它可以通过螯合金属离子的方式,将细胞中的金属离子与其结合,使其无法被核酸酶降解。以下是使用Chelex-100提取DNA的简单步骤:
1. 样品准备:收集含有目标DNA的样品,如血液、组织、唾液等。样品将被加入到Chelex-100的溶液中进行处理。
2. 细胞溶解:如果样品中存在细胞,首先需要对其进行溶解。这可以通过加入细胞裂解缓冲液来实现。缓冲液中通常含有Tris-HCl、EDTA、蛋白酶K等试剂,可以有效地破坏细胞膜和细胞核。
3. 加入Chelex-100:将Chelex-100树脂(通常以浓度10%~20%的溶液形式使用)加入到裂解后的样品中。通常的比例是每100 μL样品加入10 μL Chelex-100溶液。
4. 温度处理:将样品与Chelex-100溶液混合均匀后,将其放置在高温(通常是95℃)下进行处理。这样可以启动Chelex-100树脂与金属离子的结合反应,并且使核酸酶失活。
5. 离心:经过温度处理后,对样品进行离心。这将使Chelex-100树脂沉淀在管底,而含有DNA的上清液则可以分离出来。
6. DNA收集:使用移液器或吸尘器小心地将上清液转移至一个新的离心管中。在转移过程中,避免带入Chelex-100树脂颗粒。
7. DNA沉淀:添加95%乙醇至上清液中,混匀后将其放置在冰箱中冷藏10-15分钟。这样可以使DNA沉淀出来。
8. 离心:将上述液体离心10-15分钟以沉淀DNA。
9. 去除乙醇:倒出上清液,然后用70%乙醇洗涤DNA沉淀。倒掉乙醇后,将离心管倒置在纸巾上,用吸球吸干乙醇。
10. DNA重溶解:最后,使用适当的缓冲液(如TE缓冲液)将DNA沉淀重溶解。
请注意,Chelex-100方法相对简单且不需要复杂的设备,但其提取的DNA适用于一些简单的应用和下游分析。对于一些特殊的样品和研究要求,可能需要使用其他更复杂的DNA提取方法。