Pull down实验
Pull down实验
服务介绍
Pull down实验，又称拉下实验，是一种体外亲和纯化技术，蛋白Pull down技术可以提供一种诱饵蛋白来特异性识别配体蛋白质，以达到富集、分离、纯化某种配体蛋白质的目的，是体外研究蛋白与蛋白相互作用的有力工具。蛋白质Pull down将被亲和试剂标签标记的诱饵蛋白固定在某种固体基质（如琼脂糖）上，当目标蛋白或细胞、组织抽提液流经该基质时，可与该诱饵蛋白相互作用的配体蛋白被捕获，通过改变洗脱液或洗脱条件回收被捕获的蛋白，再利用蛋白质印迹或质谱方法检测这种互作关系。
服务内容
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电子图片及分析结果；完整实验步骤
附件：
免疫学检测服务 —GST pull-down实验：
GST Pull-down又叫做蛋白质体外结合实验，是在体外条件下验证或寻找蛋白质间相互作用的方法。
项目 | GST pull-down实验 |
实验原理 | * 该技术是利用了GST对谷胱甘肽(GSH)偶联球珠的亲和性，首先采用重组表达技术表达带有GST(谷胱甘肽转移酶)标签的“鱼饵”蛋白，再利用该鱼饵蛋白和细胞裂解液进行孵育，捕获能够与鱼饵蛋白结合的靶分子，然后加入带有谷胱甘肽（GSH）标记的琼脂糖珠子，GSH在GST的催化作用下将蛋白复合物链接到琼脂糖珠子上，低速离心收集上述复合物从而进行后续SDS-PAGE等分析 |
应用 | * 可证明预测的蛋白质-蛋白质间可能存在的相互作用 * 寻找与已知蛋白发生相互作用的未知分子 |
优点 | * 多采用标签（如GST）抗体来检测，适用范围广 * 操作简单，是可直接检测蛋白质间相互作用的有效方法 |
GST pull-down 实验流程：
免疫学检测服务 — RNA/DNA pull-down实验：
RNA/DNA pull-down是研究体外条件下RNA或DNA与蛋白互作的重要技术。
项目 | RNA/DNA pull-down实验 |
实验原理 | * 该技术是通过体外转录目的RNA的一部分或全长，用生物素标记RNA/DNA探针，与胞浆蛋白提取液孵育，形成RNA/DNA—蛋白质复合物。再利用链亲和素标记的磁珠或琼脂糖珠，将上述复合物从细胞裂解中分离开来。然后进行洗脱，SDS-PAGE或银染等验证靶标分子 |
应用 | * 可验证某种蛋白与目的RNA/DNA是否有相互作用 * 纯化的蛋白经质谱鉴定，即可筛选到与目的RNA结合的蛋白 |
优点 | * 该技术是捕获RNA/DNA-蛋白复合体的常用方法 * 能够进行目的RNA或DNA的互作蛋白验证或筛选，如验证或寻找特定基因的转录因子 |
RNA/DNA pulldown 实验流程：
