qpcr mix成分
qPCR(定量聚合酶链式反应)是一种用于定量测定样本中特定DNA序列的技术。qPCR中的PCR反应混合物通常包含以下组分:
1. 模板DNA:需要定量的DNA样本,可以是基因、病毒、细菌等。
2. 引物(primers):用于选择性扩增目标DNA序列的短DNA片段。一对引物由两个互补的DNA片段组成,分别位于目标DNA序列的起始和终止位置。
3. 探针(probes):用于定量测定PCR扩增产物量的标记物。常见的探针包括荧光探针(例如SYBR Green、荧光素化探针)和探头探针(例如TaqMan探针、分子束探针)。
4. DNA聚合酶:通常使用热稳定的Taq DNA聚合酶,它具有高温稳定性,在PCR反应中能够持续性地合成DNA链。
5. 反应缓冲液:包含适当的缓冲剂和盐,用于维持酶在反应中的活性和稳定性,并提供适当的离子浓度和pH条件。
6. dNTPs:脱氧核苷酸三磷酸盐,包括dATP、dCTP、dGTP和dTTP,作为聚合酶合成新DNA链所需的核酸单元。
7. 镁离子(Mg2+):作为DNA聚合酶反应的催化剂,为引物结合和DNA合成提供所需的条件。
8. 添加剂:根据具体反应需求,可以添加一些增强PCR反应效率、特异性和稳定性的添加剂,例如BSA(牛血清蛋白)、Tween-20(表面活性剂)等。
以上是qPCR反应混合物中常见的组分,其比例和浓度都会根据具体实验设计和目标DNA的特性进行优化和调整。