pcr的三个基本反应
PCR(聚合酶链式反应)是一种可以从小量DNA样本中扩增大量特定DNA序列的技术。它由三个基本反应组成,即变性、退火和延伸。
1. 变性(Denaturation):PCR反应开始时,DNA样本中的双链DNA会在高温条件下被变性,使之解开成两条单链DNA。这个步骤通常在94-98°C的高温下进行,持续时间一般为15-30秒,以确保DNA完全解开。
2. 退火(Annealing):接下来的步骤是将称为引物(primers)的短DNA片段与目标DNA序列的两端结合。这个步骤需要将反应温度降低至50-65°C左右,以保证引物与目标DNA序列能够特异性地结合。退火温度和时间的选择将取决于引物的碱基组成和目标DNA序列的长度。
3. 延伸(Extension):在引物结合到目标DNA序列的两端后,聚合酶(一种DNA合成酶,通常使用热稳定的Taq DNA聚合酶)开始合成新的DNA链。此步骤需要将反应温度升高至72°C,以提供聚合酶的最佳活性。聚合酶按照引物结合的DNA模板序列,将自由核苷酸与DNA链连接,延长新的DNA链。这个步骤的时间会根据目标DNA序列的长度而有所变化。
上述的三个基本反应(变性、退火和延伸)循环进行多次,每次循环都会产生新的DNA链。通过连续的循环,可以在几小时内从少量DNA样本中扩增出大量特定DNA序列。