琼脂糖凝胶回收原理

琼脂糖凝胶回收是基于蛋白质分子的大小、形状和电荷等性质在凝胶柱上的分离原理。琼脂糖凝胶是由高分子物质琼脂糖(agarose)构成的一种凝胶,具有多孔结构。

 

当样品中的蛋白质进入琼脂糖凝胶柱时,较大的蛋白质分子会较快地受到凝胶孔道的阻碍,难以进入孔道,因此在凝胶柱顶端堆积,洗脱时较晚;而较小的蛋白质分子则能够更容易地进入凝胶孔道,因此在凝胶柱中逐渐下移,洗脱时较早。

 

此外,琼脂糖凝胶还具有电荷亲和性,即它能根据蛋白质的电荷特性进行选择性吸附。在特定pH条件下,凝胶柱表面的琼脂糖分子带有正电荷,因此具有负电荷的蛋白质会与凝胶柱表面相互作用,而中性或带有正电荷的蛋白质则不会与凝胶柱表面发生相互作用。

 

综合上述两个原理,琼脂糖凝胶回收过程中,较大、负电荷的蛋白质会在凝胶柱顶部逐渐累积,而较小、中性或正电荷的蛋白质会通过凝胶柱逐渐洗脱。通过调节洗脱缓冲溶液的条件,可以实现目标蛋白质的选择性洗脱和纯化。

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