加了促凝剂的血怎么提取DNA
加了促凝剂的血液样本中提取DNA的方法和未加促凝剂的样本类似,不同的是在提取过程中需要注意去除促凝剂的影响。以下是一种常用的提取方法:
1. 样本准备:将加了促凝剂的全血样本倒入离心管中,离心5-10分钟(3000-5000xg),将上清液倒掉。
2. 细胞溶解:将沉淀的红细胞溶解,加入PBS缓冲液(pH 7.4)洗涤红细胞,离心5分钟(3000-5000xg),将上清液倒掉。
3. 细胞裂解:将洗涤后的细胞沉淀加入裂解缓冲液(如含有蛋白酶K的裂解缓冲液),将样品进行快速均匀混合。
4. 蛋白酶消化:将样品在适当的温度下(如55℃)孵育一段时间(一般为1-2小时),使蛋白酶K消化细胞膜和核酸蛋白复合物。
5. DNA纯化:加入等体积的酚/氯仿(pH 7.9)混合物,快速混合离心。保留上清液。
6. DNA沉淀:将上清液中的DNA用等体积的冷乙醇或异丙醇沉淀,离心沉淀。
7. DNA洗涤:将DNA沉淀用70%的乙醇洗涤,旋转离心除去乙醇。
8. DNA溶解:将洗涤后的DNA沉淀用适量的缓冲液(如TE缓冲液)溶解。
以上是一种常用的方法,可以用于加了促凝剂的血液样本中提取DNA。不同的实验室和研究目的可能有不同的变体和改进方法,因此在具体实验前最好参考相关文献或使用商业化DNA提取试剂盒来进行。