10x单细胞转录组测序背景高
在10x单细胞转录组测序中,背景噪音通常由以下几个因素引起:
1. 空载体:10x单细胞转录组测序中使用的GEM(Gel Bead in Emulsion)方法,需要将单细胞和反转录材料封装到一起形成GEM颗粒,而有时会发生空载体的情况,即反转录材料没有成功与单细胞结合,导致一些GEM颗粒中没有实际的细胞转录组信息。这样的GEM颗粒会导致一定的背景噪音。
2. 低质量细胞:在细胞捕获和反转录的过程中,有些细胞的RNA质量可能较低,或者细胞本身在处理过程中已经受到损伤。这些低质量细胞也可能引入背景噪音。
3. PCR扩增偏差:10x单细胞转录组测序中通常要进行多轮PCR扩增,这可能导致在反转录和扩增过程中,某些基因片段得到过度扩增,而其他基因片段则得到较少扩增,造成表达量上的偏差。
4. 杂交效率差异:在GEM颗粒中,每个细胞的RNA与反转录材料之间的杂交效率可能存在差异,这可能导致某些基因的表达量被低估或高估。
虽然以上因素可能会引入一定的背景噪音,但10x单细胞转录组测序技术已经不断改进,通过质控和数据处理方法,可以尽可能减少这些背景干扰,提高数据的质量和准确性。