感受态细胞的制备
感受态细胞的制备主要涉及大肠杆菌的培养和预处理。以下是感受态细胞制备的基本步骤：
1. 大肠杆菌培养：从冰冻保存的细胞库或者已有的细胞培养物中取出适量的大肠杆菌。将其接种到含有适当营养成分和抗生素（如氨苄青霉素或卡那霉素等）的液体培养基中，并在适当的温度下进行培养。
2. 生长期控制：大肠杆菌需要在对数生长期才能更高效地接受外源DNA。因此，需要根据目标实验的要求和预设的转化时间选择适当的培养时间。常见的方法是用前一天培养的对数期培养菌接种新的培养液，并在适当条件下继续培养至适当的生长阶段。
3. 洗涤感受态细胞：将培养细胞通过离心等方法收集，并用适当的缓冲液（如冷蒸馏水或50 mM CaCl2）进行洗涤。洗涤的目的是去除培养基中的抗生素和其他成分，以减少对后续转化过程的干扰。
4. 感受态处理：将洗涤后的细胞重悬于合适的转化缓冲液中，例如50 mM CaCl2。转化缓冲液中的阳离子（如Ca2+）有助于细胞膜的稳定和DNA的吸附。对于某些细菌株，还可以加入一些辅助物质（如DMSO或PEG等），以增加转化效率。
5. 转化后处理：将重悬的感受态细胞与外源DNA（如质粒）共处理。共处理的方式有电穿孔、热冲击或化学方法等。这些方法可以破坏细胞膜结构，使外源DNA能够进入细胞内。
6. 恢复和筛选：转化后的细胞需要在适当的培养条件下恢复，并在选择性培养基上进行筛选。选择性培养基中通常加入相应的抗生素，以筛选带有外源DNA的细胞。然后，可以进行鉴定、培养和后续实验。
需要注意的是，不同的大肠杆菌株和实验目的可能需要进行微调和优化。此外，制备感受态细胞时应注意操作的无菌和安全，以确保实验结果的准确性。
