感受态细胞dh5α
DH5α是一种常用的感受态细胞系，通常用于质粒转化和DNA克隆等实验。以下是制备DH5α感受态细胞的一般步骤：
1. 制备LB培养基：将适量的LB培养基制备好，用来培养和恢复感受态细胞。
2. 预处理DH5α细胞：取出存储在-80°C的DH5α菌种，迅速挤入预先预热的LB培养基（37°C），静置培养室中37°C恢复培养1-2小时，至达到培养菌液的A600值约为0.4-0.6。
3. 准备转化混合物：将外源DNA（如质粒）以适当浓度加入管内，通常使用1-5 μg DNA；然后加入雄黄质粒DNA（carrier DNA）以减少DNA粘附到管壁上；加入适量的感受态细胞液，使总体积约为50-100 μl。
4. 转化：将转化混合物转移到预先冷却的转化舟或管中，然后在冰上冷静静置5-30分钟。
5. 加入LB培养基：将转化混合物加入预先预热的LB培养基中，通常使用500 μl-1 ml的LB培养基。
6. 恢复培养：将转化培养液移至37°C的恢复培养环境中，在振荡培养箱中以220-250 rpm的速度恢复培养1-2小时。
7. 锥形离心：将恢复培养液进行锥形离心，去除上清液，保留沉淀。
8. 增殖培养：将沉淀悬浮在预热的LB培养基中，进行增殖培养，通常在37°C的振荡培养箱中以220-250 rpm的速度培养。
9. 平板筛选：将部分增殖培养液区域平铺到含适当抗生素的LB平板上，进行单克隆的筛选。
以上是制备DH5α感受态细胞的一般流程，具体步骤和条件可能会因实验要求和实验室特定情况而有所调整。
