大肠杆菌dh5a感受态制备
DH5α是一种常用的感受态细胞系，用于质粒转化和DNA克隆等实验。以下是制备DH5α感受态细胞的一般步骤：
1. 制备LB（Luria-Bertani）培养基：将适量的LB培养基加入培养瓶中，并在震荡培养箱中以室温震荡均匀。
2. 预处理DH5α细胞：取出保存在-80°C的DH5α菌种，将管子迅速放到冰上，冰冻至菌种融化后，立即将其转移到预热的LB培养基中，将管子在培养室中37°C恢复培养1-2小时，直到达到培养菌液的A600值约为0.4-0.6。
3. 准备转化混合物：将需要转化的外源DNA（如质粒）以适当浓度加入转化管（或Eppendorf管）中，常用浓度为25-100 ng/μl。加入雄黄质粒DNA（carrier DNA）以帮助细胞摄取外源DNA，加入适量的DH5α感受态细胞液（通常使用50-100 μl），使总体积约为200-500 μl。
4. 转化：将转化混合物转移到预冷的转化舟或管中，然后在冰上静置15-30分钟，使细胞摄取外源DNA。
5. 加入LB培养基：将转化混合物加入预先预热的LB培养基中，常用体积为1 ml。慢慢转移转化混合物到培养基中，避免产生气泡。
6. 恢复培养：将转化培养液移至37°C的恢复培养环境中，在振荡培养箱中以220-250 rpm（转/分）的速度恢复培养1-2小时。
7. 锥形离心：将培养液进行锥形离心，以收集菌体。离心参数通常为3000 rpm，4°C，5分钟。
8. 去除上清液：将上清液倒掉，保留沉淀。
9. 悬浮细胞：使用适量的滤式无菌纯水，轻轻将菌体重新悬浮。
10. 鉴定质粒转化：取部分悬浮液通过点接种法或均匀平铺法，接种到含有适当抗生素的LB平板上，进行质粒转化鉴定。
以上是制备DH5α感受态细胞的一般流程，具体步骤和条件可能会因实验要求和实验室特定情况而有所调整。
