细胞外囊泡提取
细胞外囊泡提取是一种从细胞培养上清液或生物体体液中分离和纯化细胞外囊泡的方法。细胞外囊泡也被称为外泡(exosome)或微泡(microvesicle),它们是由细胞释放的脂质双层囊泡,包含细胞膜上的一些蛋白质、RNA、miRNA、DNA等。这些囊泡通过与其他细胞进行相互作用,参与了细胞间的信息传递和调节。
以下是一种常用的细胞外囊泡提取方法(差速离心法的变体):
1. 细胞培养上清液或体液的收集:将细胞培养液或生物体体液进行离心,以去除细胞和细胞碎片。收集上清液或体液。
2. 预离心:将收集到的上清液或体液进行低速离心,一般在300 × g左右离心15-20分钟,以去除大颗粒的细胞碎片和细胞残骸。
3. 高速离心:将预离心后的上清液进行进一步的高速离心,一般在10,000 × g至20,000 × g之间离心 30-60分钟,以沉淀囊泡。
4. 囊泡洗涤:将囊泡沉淀用适当的缓冲液(例如PBS)进行洗涤,一般先用缓冲液悬浮囊泡,然后再一到两次进行高速离心以得到囊泡沉淀。
5. 囊泡纯化:囊泡沉淀可以经过蔗糖密度梯度离心等纯化步骤,以去除可能的污染物。
注意:细胞外囊泡的提取方法因实验目的和样本情况而各异,上述方法仅供参考。不同的实验室可能会采用不同的提取方法和步骤。