SWATHDIA定量技术
SWATH(Sequential Window Acquisition of All Theoretical Mass Spectra)/DIA(Data-Independent Acquisition)是一种质谱技术,用于全面和定量地分析蛋白质和肽段。
SWATH/DIA技术的原理如下:
1. MS1扫描:样品中的蛋白质首先通过高性能液相色谱(LC)进行分离。然后,使用全扫描MS1扫描模式,质谱仪对样品中的所有化合物进行质谱分析,生成一个母离子峰谱。
2. SWATH窗口:在分析期间,SWATH技术将质谱扫描窗口划分为固定大小的窗口,每个窗口范围内质谱仪进行高能碰撞解离(HCD)。
3. MS2扫描:在每个窗口范围内,质谱仪对母离子进行碰撞诱导解离(CID)或高能碰撞解离(HCD),生成碎片离子的质谱数据。
4. 数据分析:生成的质谱数据被用于与已知蛋白质数据库进行比对,以鉴定和定量样品中的蛋白质和肽段。通过分析每个SWATH窗口中的质谱数据,可以获得更全面和准确的蛋白质定量结果。
SWATH/DIA技术的优势在于能够同时分析和定量大量的肽段和蛋白质,在不丧失灵敏度和准确性的情况下提供更全面的信息。与传统的数据依赖采集(DDA)技术相比,SWATH/DIA能够克服DDA的局限性,并提供更可靠和重复的蛋白质定量结果。这使得SWATH/DIA技术在蛋白质组学研究中得到广泛应用,特别是在复杂样品的分析和生物标记物发现中有很高的潜力。