itraq定量蛋白组学原理
iTRAQ(Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantification)是一种定量蛋白质组学技术,用于同时比较多个样品中蛋白质的相对丰度。其原理如下:
1. 标记:待测的蛋白质样品首先进行消化,得到肽段。然后,采用iTRAQ试剂进行标记。iTRAQ试剂由两部分组成:标识基团和连接基团。标识基团是由同位素标记的化学物质组成,不同样品使用的标识基团具有相同的质荷比,但具有不同的质量校正离子(质谱标识),用于标记不同样品。连接基团通过共价键连接到肽段上,使其与标记基团结合。
2. 混合:标记完的样品混合在一起形成一个复杂的蛋白质混合物。
3. 高性能液相色谱-质谱(LC-MS/MS)分析:将混合后的样品通过高性能液相色谱(LC)进行分离,然后将每个肽段逐个离子化并进行质谱分析。在质谱仪中,通过碰撞诱导解离(CID)或者高能碰撞解离(HCD)来断裂标记的肽段。
4. 数据分析:通过分析质谱数据,可以得到每个肽段的质荷比和峰面积信息。峰面积反映了不同样品中标记肽段(以及相应的蛋白质)的相对丰度。通过计算峰面积比例,就可以推导出不同样品中蛋白质的相对丰度信息。
通过iTRAQ定量技术,可以同时比较多个样品中蛋白质的相对差异。该技术具有高通量、高灵敏度和高定量精度的特点,广泛应用于生物医学研究中,特别是在比较蛋白质组学研究和药物研发中的样品比较和定量分析中。