iTRAQTMT定量技术

iTRAQ(Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantification)和TMT(Tandem Mass Tag)都是定量蛋白质组学中常用的技术,用于同时比较多个样品中蛋白质的相对丰度。

 

iTRAQ和TMT的原理和步骤类似,主要包括以下几个步骤:

 

1. 样品准备和消化:将待测蛋白质样品提取并进行蛋白质消化,将蛋白质酶解成小片段的肽段。

 

2. 标记反应:将不同样品中的肽段与不同的化学试剂进行反应,引入特定的标记基团,这些基团具有相同的质荷比,但具有不同的质量校正离子(质谱标识),用于标记不同样品。

 

3. 标记样品混合:将标记完成的样品混合在一起,形成一个复杂的蛋白质混合物。混合可以采用等量混合或按照实验所需比例进行混合。

 

4. 高性能液相色谱-质谱(LC-MS/MS)分析:将混合后的样品通过高性能液相色谱(LC)进行分离,然后将每个肽段逐个离子化并进行质谱分析。

 

5. 数据分析:通过分析质谱数据,可以得到不同样品中肽段的相对丰度信息。一般使用生物信息学软件对质谱数据进行处理和分析,通过计算肽段的峰面积或峰高,就可以推导出不同样本中蛋白质的定量信息。

 

iTRAQ和TMT的不同之处在于所用的标记试剂不同。iTRAQ采用的是具有4-plex或8-plex的标记试剂,可以标记4个或8个样品;TMT则有更多的选择,包括6-plex、10-plex等不同标记试剂,可以同时标记更多的样品。

 

此外,iTRAQ和TMT在质谱分析的过程中,通过碰撞诱导解离(CID)或者高能碰撞解离(HCD)来断裂标记的肽段,得到每个标记离子的相对丰度信息。

 

总的来说,iTRAQ和TMT都是有效的多样本蛋白质定量技术,可以用于研究不同生物样本中的蛋白质表达差异,并为生物学研究提供重要的定量数据。

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