iTRAQTMT定量技术 (2)
iTRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantitation）和TMT（tandem mass tags）是两种基于同位素标记的定量质谱技术，用于在复杂混合样品中定量分析蛋白质的相对和绝对丰度。
iTRAQ和TMT技术的原理如下：
1. 样品标记：样品中的蛋白质首先通过消化为肽段，然后使用iTRAQ或TMT试剂对不同样品进行标记。这些标记试剂包含同位素标记的化学团，可以与肽段中的氨基基团反应。
2. 混合和分离：标记的样品被混合在一起，并使用高性能液相色谱（LC）进行分离。在分离过程中，样品经过逐渐增加的极性梯度，从而分离出不同肽段。
3. MS/MS扫描：在质谱仪中，使用数据依赖扫描（DDA）或数据独立扫描（DIA）模式，对每个肽段进行质谱分析。质谱仪将选择一个肽段并将其碰撞诱导解离（CID）或高能碰撞解离（HCD），生成其碎片离子质谱数据。
4. 质谱数据分析：通过与已知蛋白质数据库比对，质谱数据被用于鉴定和定量样品中的蛋白质。iTRAQ和TMT标签中的同位素标记允许区分不同样品中的肽段。
5. 定量计算：iTRAQ和TMT技术通过比较同种同位素标签的离子峰的相对强度来计算样品中蛋白质的相对丰度。通过对样品中所有标记肽段的相对丰度进行平均化，可以得到每个蛋白质的相对定量结果。此外，由于iTRAQ和TMT标签中的同位素标记含有不同的质量，可以通过计算不同标签离子峰的相对强度来计算蛋白质的绝对丰度。
iTRAQ和TMT技术的优点在于可同时分析多个样品，提供高通量的蛋白质定量。通过同位素标记，可以克服样品之间的变异性和质谱的系统性误差，提高定量结果的准确性和可靠性。这些技术被广泛应用于蛋白质组学研究中，特别是在生物标记物发现和相对定量研究中。
