gst pull down原理
GST pull-down是一种常用的蛋白质亲和纯化技术,用于研究蛋白质相互作用。其基本原理如下:
1. GST结合:首先,目标蛋白(通常是蛋白复合物的一个成员)被连接到谷胱甘肽-S-转移酶(Glutathione-S-Transferase,GST)标签。GST是一个具有较高亲和力的标签,可以与谷胱甘肽(Glutathione)结合。
2.蛋白复合物沉淀:经过GST标签连接的目标蛋白会与其他与其相互作用的蛋白形成复合物。然后,细胞裂解产物中的复合物被添加到含有谷胱甘肽的Glutathione琼脂糖层析柱中。
3. GST pull-down:GST标签的目标蛋白以及与其相互作用的蛋白会与谷胱甘肽结合。这样,复合物就被特异地捕获在层析柱中。
4.盐洗和洗脱:随后,通过用高浓度的盐或其他洗脱缓冲液冲洗层析柱,脱除非特异性结合的蛋白质。最终,目标蛋白及其相互作用蛋白被洗脱到洗脱缓冲液中。
5. 分析:洗脱的蛋白样品可以用于进行后续的表征和分析,例如SDS-PAGE凝胶电泳、质谱或其他蛋白质学技术。
GST pull-down是一种常用的蛋白质亲和纯化技术,可以用于研究蛋白质间的物理相互作用,以及分析蛋白质复合物的组成和结构。