石蜡切片步骤
制备石蜡切片是对细胞和组织的研究中重要的步骤，既可以分辨组织结构，也可以进行病理诊断。石蜡制块作为组织切片的载体，为后续的染色、显微镜观察提供基础，其制备过程需要经过多个步骤的处理。本文将详细介绍制备石蜡切片的步骤。
1. 穿刺和固定样品
首先获取需要制备切片的样品，如肝、肺、肾、脑、胃或其他器官组织等。为了固定组织细胞结构，从组织中夹取一小块，用镊子或铲子在福尔马林固定液中穿刺3-5秒钟，然后立即放入含福尔马林的固定液中进行固定。福尔马林用量一般为10%的浓度，固定时间依据组织性质及固定液浓度不同，常见时间为一夜或48小时。特殊样品固定时间需依据实验需要调整。固定后，组织应该表面光滑、形态完整、不变形或变形轻微。
2. 去除固定液
固定后，组织不直接埋入石蜡，需要去除固定液，以免在石蜡块制备过程中形成空洞，影响石蜡入渗和切片品质。将固定完毕的组织，先用水洗几遍去除多余的福尔马林，然后用70%乙醇硬化15-30分钟，再用96%乙醇浸泡1-2小时，使细胞内水分逐步向外扩散，同时从表面渗透至内部。
3. 嵌入石蜡
去除固定液后，将处理后的样本嵌入石蜡中。首先将组织置于60℃或65℃的熔蜡中，石蜡温度需超过其熔点，将组织脱水、逐渐亲水性降低，彪高柔韧度和硬度，定型最终被动膨胀渗入。将溶蜡的石蜡温和加热至60°C-65℃左右，待组织脱水50%-70%后将其挂在医用纸张上，将熔蜡轻固一下，迅速投入64℃-68℃的石蜡中浸泡，让组织均匀被覆，熔蜡渗透。为了避免翻车、石蜡和组织破损，坚持细心，不要重压、抽枪和颠簸。
4. 制备石蜡块
制备好的石蜡块是切片的载体。依据所需大小，用石蜡刻制器将加工好的石蜡块裁剪成适宜大小，再将制备好的组织甩入石蜡块温软的表层中置，尽量让其悬浮于石蜡中，然后加热并冷却，经过石蜡完全分配和均匀地包裹组织，使组织与石蜡块紧密结合。
5. 裁剪切片
将制好的石蜡块放入切片机中进行切片，石蜡块加工后将快速固化成为固态的样本垫片。切片时需调整刀片、速度和切面的大小，整个流程中保证样品能够被切割成适宜大小的薄层。常见的切面厚度为2-10μm，一般为4-6μm。
6. 去除石蜡
切好的组织切片上还黏附着石蜡，必须彻底去除。首先将切片浸没于二甲苯等有机试剂中，使其与石蜡溶解，然后再用96%乙醇、70%乙醇和去离子水洗涤干净。
7. 染色
组织切片的图像需要通过染色显微观察，染色是实验中必不可少的步骤。常用的染色剂有艾则染剂（HE）和玫瑰染剂（EOS）等。染色后，组织切片的结构和细胞形态在显微镜下便可以清晰地分辨出来，从而揭示组织的生物学机制和病理变化。
8. 封片
为了保持切片的纵向平整和观察的舒适度，最后将切片用透明胶体制成玻片，并用封片机将玻片和盖玻片封闭起来，以便保留。
总之，制备石蜡切片的核心是：组织样本的清晰取样与穿刺，福尔马林固定，去水蜡、嵌入蜡、制备石蜡块、切片、除蜡、染色和封片八个步骤，这些步骤的正确运用直接影响组织切片的质量和结果。
