RNA常用的几种提取和纯化的方法
RNA提取和纯化是生物学和分子生物学实验中的一项基本技术。它可以从细胞或组织中分离出RNA,并去除杂质如DNA、蛋白质、油脂和其他溶质。RNA的提取通常在样品可得到的量和RNA需要升级的纯度之间取得平衡。在这篇文章中,我们将简要介绍一些RNA提取和纯化的常用方法。
1. 酚酸法
酚酸法是RNA提取和纯化的最常见方法之一。它是一种三步法,第一步是使用TRIzol试剂将组织或者细胞裂解;第二步是加入氯仿,用于将混合物分为水性和有机相;第三步是将RNA从水相中提取并用异丙醇沉淀。TRIzol试剂容易获取,可以广泛应用于多种不同的样品类型,提取出来的RNA质量和纯度也可以满足大多数实验要求。
2. 硅胶柱法
硅胶柱法是常用的RNA纯化方法,具有较高的RNA纯度和质量。这种方法适用于小样本量和需要纯化高质量RNA的标本。其核心原理是通过硅胶柱将样品分离成RNA和其他杂质,从而获得高质量RNA。硅胶柱法主要应用于纯化较小的RNA片段。
3. 无机物方法
无机物方法包括氯化胆钠法和钠醇法,是另一种RNA提取方法。它的基本原理是使RNA在水中萃取。这种方法适用于大批量样品。然而,这种方法的RNA质量可能不及酚酸法和硅胶柱法。
4. 铵盐法
铵盐法是另一种RNA提取方法。它用氯化铵沉淀杂质并分离RNA,并用酒精沉淀RNA。这种方法不会影响RNA的纯度和完整性,而且可以大幅减少一些样品类型中的杂质。但是,它需要更长的时间和更多的步骤,且部分RNA可能无法溶解,不能获得全部RNA产量。
5. 免疫磁珠法
免疫磁珠法是一种新兴的RNA提取和纯化方法。它可以利用RNA结合的特定抗体或寡核苷酸序列以及磁珠来分离和提取RNA。这种方法可以降低RNA提取过程中的工艺变异性,且可以同时处理多个样品。但是,由于RNA结合抗体的特异性较强,所以对于某些RNA,可能会有较低的RNA产量和过高的RNA损失。
由此可见,各种RNA提取和纯化方法各具特点,应选择合适的RNA提取和纯化方法依据实验的目标和样品类型进行操作。在实验过程中检查RNA的质量和纯度是必要的步骤。从细胞中提取RNA时,保持细胞完整性对得到高质量RNA非常重要。因此,在RNA提取和纯化过程中,应当尽量避免样品在高压力下裂解或长时间储存。