RNA粗品如何进一步纯化
RNA是一种重要的生物大分子，它在生物体内的作用非常重要，包括遗传控制、基因表达和翻译等。因此，随着现代生物学的发展，越来越多的生物学家们需要从样品中提取RNA，并对RNA进行研究分析。但是，从样品中提取出的RNA通常存在一定的杂质，需要进一步纯化。本文介绍了常用的RNA粗品纯化方法。
一、氯仿抽提法
氯仿抽提法是一种常见的RNA纯化方法。将粗品RNA加入等体积的氯仿中，摇匀混合，然后离心分离。RNA会分布在上层水相中，而DNA和蛋白质会分布在下层有机相中。收集上层的水相，添加同体积的异丙醇或乙醇，沉淀RNA，然后用75%的乙醇洗涤，最后在空气中晾干或真空干燥即可。
此方法原理简单，操作易行，可以提取RNA且纯度较高，但需要注意的是，必须将氯仿和水完全分离，否则会导致RNA的丢失或降解。此外，该方法不适用于从一定数量的组织或细胞中提取RNA。
二、酚/氯仿/异戊酮法
酚/氯仿/异戊酮法是一种粗品RNA纯化方法。先将RNA粗品置于酚/氯仿/异戊酮混合液中，并离心分离。RNA分子会分布在上层的酚相中，没有结合的DNA和蛋白质则分布在异戊酮相中。然后收集上层的酚相，用缩醛或异丙醇沉淀RNA即可。如果需要提高RNA纯度，仍需用浓盐溶液（如3M NaCl）或酸性异丙醇进行提纯。
优点是纯化效果好，适用于细胞和组织样品的提取，吸附剂容易得到。但是，缺点是该方法的操作时间长，不利于大规模应用。
三、离心柱层析法
离心柱层析法是一种比较先进的RNA粗品纯化方法。它使用专门的RNA萃取剂或吸附剂，可以在不影响RNA转录或逆转录效率的情况下去除RNA中的杂质。与其他大多数RNA纯化方法不同，此方法也适用于一定量的细胞和组织样品。
层析柱的选择主要取决于RNA分子的长度、质量和目标。对于较短的RNA分子，小柱子具有更好的精度和灵敏度，而大柱子可以用于长RNA的制备。吸附剂包括硅胶、玻璃纤维、树脂和磁性微珠等。
该方法优点是操作简单方便、减少RNA剪切和降解，可以少量高质量的RNA提取，缺点是吸附剂成本高、柱子容易堵塞和使用寿命短。
四、硅胶膜法
硅胶膜法是一种高效的RNA粗品纯化方法。该方法的原理是，RNA分子与硅胶膜上的固相有较强的疏水作用，而杂质如DNA、蛋白质等则不会与其结合。硅胶膜可分为细颗粒和大板两种。硅胶膜法适用于RNA精炼和小RNA的分离。
首先将RNA粗品放置于硅胶膜上，然后利用不同的缓冲液洗去各种杂质，并用酒精等溶剂进行洗脱。优点是使用方便、处理大量样品、提取高质量RNA，缺点是硅胶膜的材质会影响RNA的浓度和复性，以及RNA分子过长，有较强的干扰作用。
RNA粗品纯化的方法有多种，每种方法都有其优缺点。选择哪种方法，要考虑RNA样品的来源、目的以及实验室设备和预算等因素。以上介绍的氯仿抽提法、酚/氯仿/异戊酮法、离心柱层析法和硅胶膜纯化法是目前最常用的几种方法，可以根据实验需要进行选择。
