单细胞atac分析流程
单细胞ATAC-seq(scATAC-seq)分析流程涉及到多个步骤,主要包括细胞处理、单细胞ATAC-seq测序、数据质控和预处理、细胞聚类、差异表达分析,可概括为以下几个步骤:
1. 细胞处理:选择感兴趣的细胞类型并将其分离,并利用化学方法开放染色质。其中重要的一步是专门的细胞核捕获技术,维持单个细胞的完整性并抓取其细胞核。
2. 单细胞ATAC-seq测序:将单个细胞核置于LB(胶体)浓度为0.4%的溶液中,并添加预先处理的ATAC-seq反应体系(启动子TM Transposase、PBS、NP40等)进行反应。ATAC-seq反应结束后,原始数据通过高通量测序仪生成。
3. 数据质控和预处理:利用软件对测序数据进行质量控制(QC),确保数据的质量。然后利用软件对序列数据进行去除低质量短序列、过滤低复杂度区域、去除PCR重复等预处理过滤。
4. 细胞聚类:对去除低质量数据和PCR重复的测序数据进行映射比对到基因组上,进行细胞间的聚类和图形绘制,用于表示细胞的个体差异性并区分不同的细胞群。
5. 差异表达分析:根据聚类结果进行表达矩阵的差异分析,找出在不同类型细胞间表达有显著差异的基因和转录因子,以得出不同组织、从事不同生物学功能的细胞的分子标志。
注:这里的软件工具可以选择的包括:Cell Ranger、Signac、Snap-ATAC、ChromVAR等,视具体需求而定。
总之,单细胞ATAC-seq是研究细胞类型,发现新的分子标志和代表性调节元件等方面的有力工具,具有一定的优点,也对一些细胞分类、转录组解析等领域情况提供了一些科学研究方向。