PCR污染及解决方案

PCR污染是每个实验室都多多少少会遇到的问题。PCR是非常灵敏的一项检测,100个拷贝之内的靶序列就足以产生阳性扩增,从而容易出现DNA污染导致的假阳性。

PCR污染来源

1、标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散,导致彼此间的污染。

2、PCR扩增产物污染:这是PCR反应中最主要最常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大,所以极微量的PCR产物污染,就可形成假阳性。在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶,在操作时比较剧烈地摇动反应管,开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝,因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题。

污染的监测

1、阳性对照:在建立PCR反应实验室及一般的检验单位都应设有PCR阳性对照,它是PCR 反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志。

2、阴性对照:每次PCR实验务必做阴性对照。在PCR试剂中不加模板DNA或RNA,进行PCR扩增,以监测试剂是否污染。

对PCR的环境污染防控

(1)清理废液缸并且对废液缸用有效氯含量为2000mg/L消毒水浸泡消除核酸污染;

(2)用有效氯含量为2000mg/L消毒水对移液枪进行擦洗,关键部位为移液枪前端易污染部位,清洁干净后用洁净水再擦拭一遍;

(3)将离心管架、扩增管架、扩增管架底板、吸嘴盒及其他相关物品用有效氯含量为500mg/L的消毒水浸泡2小时后,用清水冲洗干净晾干后使用;

(4)对污染区域内的设备如扩增仪、全自动提取仪等,使用核酸气溶胶污染清除剂进行反复处理;对生物安全柜等含有空气过滤系统的设备,需更换过滤网;

(5)用有效氯含量为500mg/L的消毒液对整个实验室(地板、墙面、天花板、门、窗户等地方)进行清洁,并且用有效氯含量为1000mg/L的消毒水对实验室进行喷雾消毒(重点部位为操作区),有效降解空气中的气溶胶与附着在实验台表面的核酸污染;同时加大通风量(内循环无用,尽可能外循环);

(6)待污染区域及设备器件清理完成后,常用设备和操作台面使用移动紫外消毒车近距离辐照1小时;实验室内则使用室内紫外灯整晚辐照。

核小体(北京)生物技术有限公司生产的核酸清除剂,安全无毒,不氧化,不腐蚀,可直接接触皮肤,全面替代传统紫外照射、含氯消毒剂等方式,能快速去除实验室核酸污染。

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