普通PCR和QPCR引物是否一样？
相同处
序列的查找是一致的；
序列选取应在基因的保守区段；
选取合适的扩增片段大小
避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对；
避免引物自身形成环状发卡结构；
Tm值在55－65℃，GC含量在40%－60%；
引物之间的TM相差避免超过2℃；
引物的3’端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基；
不同处
Real time PCR引物
PCR产物长度；real-time PCR要求在300bp以内，一般首选80-150bp 之间；
多对目的基因同时扩增，文献上查来的引物条件会不同，需要设计尽可能条件一致的引物；
目的基因含量比较低时，需要设计灵敏度比较高的引物；
相对电泳法，Real time PCR灵敏度比较高，对引物的要求更高，引物二聚体要少；熔解曲线要求单一产物；
Real time PCR的目的是进行定量或者相对定量，对扩增的效率有要求；对引物的二级结构要求高；
普通PCR 引物
PCR根据实验的要求不同，长度一般是从150bp到几千bp 不等；
对二级结构要求没有real time PCR 高；
对扩增效率要求不高；
可以选用梯度PCR 仪，选择不同退火温度，对引物退火温度要求不需要一致；
验证时不同
引物的特异性（相同点）
引物的特异性在使用前用blast 来保证；
不同点
real time PCR在实验结果中通过熔解曲线来验证；
PCR的特异性产物峰应与引物报告中的PCR product 相差在两度之内；
普通PCR 通过产物的长度，跑条带，来鉴别产物的特异性；
Real time PCR 可以通过扩增曲线，熔解曲线分析来鉴别产物的相对量，同时也可以对终产物进行电泳分析，更全面，更科学！
核小体（北京）生物技术有限公司生产的5X 高效 Taq PCR 预混液，含有高纯度的 Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR 增强剂和稳定剂，使用时只需加入模板、引物和水，使其工作浓度为 1×, 即可进行反应，大大简化了操作过程，提高了效率，整个反应体系非常稳定，减少了 PCR 操作过程中的人为误差，节约操作时间，降低污染几率，具有快速简便、重复性高、特异性好、灵敏度高和稳定性好的特点。
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