组织RNA 抽提失败的两大原因和解决方案

RNA降解和组织内杂质的残留关于降解问题,首先看一下为什么从培养细胞中抽提RNA不容易降解。现有的RNA抽提试剂,都含有快速抑制Rnase的成分。在培养细胞中加入裂解液,简单的混匀,即可使所有的细胞与裂解液充分混匀,细胞被彻底裂解。细胞被裂解后,裂解液中的有效成分立即抑制住细胞内的Rnase,所以RNA得以保持完整。也就是说,培养细胞由于很容易迅速与裂解液充分接触,所以其RNA不容易被降解;反过来讲,组织中的RNA之所以容易被降解,是因为组织中的细胞不容易迅速与裂解液充分接触所致。因此,假定有一种办法,在抑制RNA活性的同时能使组织变成单个细胞,降解问题也就可以彻底解决了。

 

液氮碾磨就是最有效的这样一种办法。但是,液氮碾磨方法非常麻烦,如果碰到样品数比较多的时候会更有此感觉。这样就产生了退而求其次的方法:匀浆器。匀浆器方法没有考虑细胞与裂解液接触前如何抑制Rnase活性这个问题,而是祈祷破碎组织的速度比细胞内的Rnase降解RNA的速度快。

 

电动匀浆器效果较好,玻璃匀浆器效果较差,但总的来说,匀浆器方法是不能杜绝降解现象的。因此,如果抽提出现降解,原来用电动匀浆器的,改用液氮碾磨;原来用玻璃匀浆器的,改用电动匀浆器或者直接用液氮碾磨,问题几乎 100% 能解决。

 

影响后续实验的杂质残留问题,其原因比降解更多样,解决方法相应也不同。总之,如果出现降解现象或者组织内杂质残留现象,则必须对具体实验材料的抽提方法/试剂进行优化。优化大可不必使用您的宝贵样品,可以从市场上购买一些鱼/鸡之类的小动物,取相应部分的材料用于RNA抽提,其它部分用于抽提蛋白质,用嘴碾磨,肠胃抽提。

 

核小体(北京)生物技术有限公司生产的组织、细胞RNA快速提取试剂盒适用于快速提取普通动物细胞和易裂解动物组织总 RNA,使用独有基因组 DNA 清除柱技术确保有效清除 gDNA 残留,不需要使用 DNase 消化,RNA 可直接用于反转录荧光定量 PCR.,Northern-blot 等下游实验。

 

 

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