植物MicroRNA,从一窍不通到略知一二
上学时,课本上只介绍过 mRNA、tRNA和rRNA,但做了科研后才知道,原来还有MiRNA、SiRNA、LncRNA、PiwiRNA、CeRNA……当小伙伴们看到这些的时候,是不是整个人都要吐了,感受到了科研的不怀好意。在LncRNA开始火热起来时,医院的小伙伴们还没有搞懂MicroRNA?你要OUT了,快来恶补一下MicroRNA一些相关的知识吧!
MicroRNA (miRNA) 是一类由内源基因编码的长度约为22nt的非编码单链RNA 分子,它们在动植物中参与转录后基因表达调控。过于教条,过于高大上?简单地讲,MicroRNA就是一条不会翻译蛋白的小RNA。为什么是22nt,而不是22bp?(nt是核苷酸,bp是碱基对)MicroRNA是用nt作为单位的,说明了miRNA是单链的。
我们在文献里看到miRNA名字有没有觉得很奇怪?有has、3p、5p,有的后面还带*号,还有的有a有b,有的a、b后面跟个-1、-2……完全看不懂有没有?我来给大家解读一下,如下图:
miRNA就是一条不会翻译蛋白的小RNA,那么miRNA对人体到底有什么作用?
给你举个例子感受一下。普通的mRNA就好比是一条高速公路,路上会有很多会排出尾气的汽车(核糖体,它们在mRNA上边走边翻译蛋白),一条高速路上会有很多辆车(多聚核糖体Polysome),车越多、开得越快,尾气就越大(蛋白表达量就越高),这个时候,在路快到尽头的地方(mRNA的3’UTR上)就出现了一个交警(MiRNA聚合一些蛋白的RISC,RNA-Induced SilencingComplex,RNA诱导沉默复合体),他稳稳地站在路的最后(通过RISC中的MiRNA与3’UTR互补,结合到mRNA的3’UTR上),整个车队就停下来了,尾气也没了(蛋白表达降低)。好了,现在也明白为什么过表达miRNA之后下游基因的mRNA变化不大,但蛋白会有变化了吧?因为警察是不会拆路的……
那植物Microrna如何提取呢?
核小体(北京)生物技术有限公司推出的植物MicroRNA提取试剂盒能实现植物总RNA和MicroRNA共提。
独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞 RNA 酶,植物 RNA 助提剂 PLANTaid 帮助结合多糖多酚并通过离心去除,然后裂解混合物通过基因组 DNA 清除柱,基因组 DNA 被清除而 RNA(包括 MicroRNA)被选择性滤过。滤过的 RNA 用乙醇调节结合条件后,RNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列特殊漂洗液快速地漂洗-离心的步骤 , 将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的 RNase free H20 将纯净 RNA(包括 MicroRNA)从硅基质膜上洗脱。
另外采用分提取操作步骤也可单独纯化富集后的 MicroRNA 组分和总RNA(>200 nt)从而得到分离富集的 MicroRNA 和 RNA。
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