植物DNA提取背后的化学原理
植物DNA的提取和纯化是植物基因工程研究的基础操作。实施分子标记、基因图谱、基因指纹图谱、基因文库构建、遗传多态性分析、DNA重组、RAPD(随机引物多态性DNA)、RFLP(限制性酶多态性)、基因分离及遗传转化和鉴定等都以提取DNA为前提。
目前,对从植物组织中提取DNA方法的要求是:简便、有效、快捷以及经济。与动物组织相比,植物组织含有较多的多糖和其他次生代谢产物(酚、酯、萜、色素等),这给高质量的DNA提取带来较多的困难。尤其是多糖成分是影响DNA纯度最常见的问题。如何做到既去除这些污染物又能相对保持高的产量,并且能简捷有效地提纯,一直是植物生物技术研究者探索的问题。一般陆地植物的DNA提取方法已经非常成熟,常见的有传统的CTAB法、SDS法等。
目前研究发现的DNA提取方法有很多,其中被应用最为广泛的DNA提取方法有传统的十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)法和SDS法。但是由于不同植物的材料组分各异,而植物其自身所含的多糖、蛋白质、酚类物质也各有不同,相同的物质浓度也会出现偏差,就使这些模式植物的DNA提取方法对不同植物DNA的提取并没有达到预期效果。相同的提取方法并不适合所有的植物,不同的植物最适合的提取方法也不同。许多的学者一直都在不断地探索着不同的DNA提取方法,研究新的方法,并针对不同的植物,在传统的提取方法上进行着一些新的改良。
但现实中很多植物其细胞壁含有大量的单宁和多糖等物质。单宁能与蛋白质和其他化合物形成交联能力的酚化合物,核酸提取过程中,大量的单宁能与蛋白质结合,而且单宁与生物碱和多糖也可发生跟单宁与蛋白质结合相似的复合反应,而大量多糖的存在,能与DNA形成共沉淀,从而影响了核酸的纯度。
几种传统植物DNA提取方法的比较:
在此,我们推荐核小体新型植物DNA提取试剂盒,其优势如下:
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- 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
- 快速,简捷,单个样品操作一般可在 1 小时内完成。
- 数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9,可直接用于PCR,Southern-blot 和各种酶切反应。