PCR 的花式死法
有人问：这个 PCR 怎么总是失败的？
拿错枪、上错样、加错试剂、弄错顺序、上机后忘启动 PCR 仪，总之你能想到的步骤总有人会出错。
但是在实验室摸爬滚打了一段时间，熟读 protocol，与 PCR 进行过多次正面交锋，结果仍然失败，这大概是高阶选手只犯高级错误了……
对于正常操作后，PCR 结果依然存在的问题，比如无扩增产物或扩增效率低、 出现非特异性扩增或 smear 带、扩增平坡等，你可能需要调整实验的各种步骤和条件。小编特别整理了以下解决方法，希望可以帮到大家：
问题 1：无扩增产物或扩增效率低
解决方法：
1. 不要使用包含 dUTP 和 dITP 的引物；
2. 样本浓度低，增加模板量；
3. 可能模板 DNA 降解，使用高质量的模板；
4. 增加延伸时间；
5. 增加循环数；
6. 优化退火温度；
7. 优化酶用量。
问题 2：出现非特异性扩增或 smear 带
解决方法：
1. 减少酶用量；
2. 缩短延伸时间；
3. 减少循环数；
4. 降低引物浓度。
问题 3：扩增平坡
解决方法：
1. 检查引物和 dNTP 等是否消耗完毕和 Taq 酶是否失活；
2. 底物过剩导致，可考虑延长延伸时间或添加 Taq 酶；
3. 非特异性扩增产物的竞争导致，需提高反应特异性；
4. 退火时产物的单链自己缔合导致，当产物浓度到达 10 pmol/100 μL 时即可发生此现象，需进行产物浓度稀释。
突然出现的福利
为彻底解决PCR实验过程中的问题，核小体（北京）生物技术有限公司开发了PCRmix相关产品，实验过程中只需您加入相关样本和引物即可顺利完成实验，完美克服pcr实验过程中的各种不确定因素，欢迎选购。
产品 1：5x Super PCR MIX（with Dye）
该制品可应用于常规 PCR 扩增和大规模基因检测。该制品中已经含有溴酚蓝染料，PCR 扩增完毕后可直接点样于琼脂糖凝胶，无需再加入 DNA LoadingBuffer。
产品 2：SYBR Green qPCR MIX（染料法 qPCR 预混液）（2x）
本产品是采用 SYBR Green 嵌合荧光法进行 Real-Time PCR 的专用试剂，产品中的 DNA 聚合酶为第三代 DNA 聚合酶，同时该聚合酶具有最高的耐受杂质能力，其对乙醇、胍盐、肝素等具有极高的耐受性，因此对于纯度较差的 DNA 模板，该 Mix 仍然可以获得理想的实验结果。
产品 3：Taqman qPCR MIX（探针法 qPCR 预混液）（2x）
本产品是采用探针法进行 Real-Time PCR 的专用试剂，产品中的 DNA 聚合酶为第三代 DNA 聚合酶， 同时该聚合酶具有最高的耐受杂质能力，其对乙醇、胍盐、肝素、血清、植物多酚等具有极高的耐受性，因此适用于粗制核酸样本的直接 PCR扩增反应，对于含有前述杂质的动植物组织、细胞、细菌、病毒、全血、血清、血浆、体液粗样本可直接进行 PCR 检测，省去了核酸提取步骤。
产品 4：Multiplex Taqman qPCR MIX( 多重探针 qPCR 预混液）（2x）
该制品不仅可用于单重的探针法定量 PCR，还允许进行多重定量 PCR （MultiPlex qPCR）检测，该制品可进行 4 重以上的定量 PCR 检测。
